Acetobacter pomorum
Acetobacter pomorum est une bactérie isolée pour la première fois des fermentations industrielles au vinaigre. Sa souche type est LTH 2458T1.
Acetobacter sp. des souches ont été isolées à partir de vinaigre traditionnel récolté dans la ville de Daegu et la province de Gyeongbuk. La souche KJY8 présentant une productivité élevée en acide acétique a été isolée et caractérisée par inférence phénotypique, chimiotaxonomique et phylogénétique sur la base d'une analyse de séquence d'ARNr 16S. L'analyse chimiotaxonomique et phylogénétique a révélé que l'isolat était une souche d'Acetobacter pomorum. L'isolat présentait une teneur en G + C de 60,8 mol%. Elle contenait l'acide LL-diaminopimélique (LL-A2pm) en tant qu'acide aminé de la paroi cellulaire et l'ubiquinone Q9 (H6) en tant que quinone principale. Les acides gras cellulaires prédominants étaient C18: 1w9c, w12t et w7c. La souche KJY8 s'est développée rapidement sur de la gélose au glucose-extrait de levure (GYC) et a formé des colonies blanc pâle avec des surfaces lisses à rugueuses. Les conditions de culture optimales pour la production d'acide acétique par la souche KJY8 étaient de 20 ° C et un pH de 3,0 avec une concentration initiale en éthanol de 9% (p / v) pour produire une concentration en acide acétique de 8% (p / v).
Acetobacter sp. des souches ont été isolées à partir de vinaigre traditionnel récolté dans la ville de Daegu et la province de Gyeongbuk. La souche KJY8 présentant une productivité élevée en acide acétique a été isolée et caractérisée par une inférence phénotypique, chimiotaxonomique et phylogénétique sur la base d'une analyse de séquence de 16SrRNA. Les analyses chimiotaxonomiques et phylogénétiques ont révélé que l'isolat était une souche d'Acetobacter pomorum. L'isolat présentait une teneur en G + C de 60,8 mol%. Il contenait de l'acide LL-diaminopimélique (LL-A2pm) en tant qu'acide aminé de la paroi cellulaire et de l'ubiquinone Q9 (H6) en tant que quinone principale. Les acides gras cellulaires prédominants étaient C18: 1w9c, w12t et w7c.Strain KJY8 se développait rapidement sur de la gélose à l'extrait de levure au glucose (GYC) et formait des colonies blanc pâle aux surfaces lisses à rugueuses. Les conditions de culture optimales pour la production d'acide acétique par la souche KJY8 étaient de 20 ° C et un pH de 3,0, avec une concentration initiale en éthanol de 9% (poids / volume) pour produire une concentration d'acide acétique de 8% (poids / volume).
Matériels et méthodes.
Dégorations bactériennes et conditions de culture. Des échantillons de vinaigre fermier ont été recueillis dans la ville de Daegu et la province de Gyeongbuk et ont été étalés sur de la gélose GYC (5% de glucose, 1% d'extrait de levure, 0,5% de CaCO3 et 2% d'agar) selon De Leyet al. [5, 24]. Les souches bactériennes formant un halo clair autour des colonies ont été isolées à 30 ° C. Pour la culture liquide, les souches isolées ont été cultivées à 30 ° C sur un agitateur horizontal à 150 tr / min. L'acidité initiale du milieu (pH) a été ajustée à un niveau souhaité avec HCl 2N. Détermination de la teneur en G + C de DN chromosomique L'ADN chromosomique a été préparé selon à la méthode de Stackebrandt et Liesack [14], et la teneur en G + C a été déterminée en utilisant la méthode de Tamaoka et Komagata [17]. Analyse phylogénétique Deux amorces, 9F (5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ') et 1542R (5'-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3'), ont été utilisées pour l'amplification du gène ARNr 16S [22], et le produit amplifié a été purifié, séquencé et aligné avec Séquences d’ARNr 16S d’acétobactéries et d’autres souches apparentées à l’aide du logiciel Clustal W [19]. L'arbre aphylogénétique a été construit en utilisant la méthode du jointement voisin [9]. Le numéro d’accès GenBank de la séquence ARNr 16S de la souche KJY8 est AB569643. Caractéristiques morphologiques et physiologiques La morphologie des cellules a été examinée par microscopie électronique à balayage (SEM). Le A. pomorum KJY8 cultivé dans un milieu GYC a été incubé dans du glutaraldéhyde à 4% à la température ambiante pendant 2 h, déshydraté dans une série graduée d'éthanol et immergé dans de l'acétate d'inisoamyle pendant 20 min [6]. La SEM a été réalisée à l'aide d'un microscope électronique à balayage Ultra Haute Résolution (Hitachi, Japon) à une tension d'accélération de 5,0 kV. Les propriétés morphologiques de la souche KJY8 ont également été déterminées selon le manuel de Bergey de bactériologie systématique [5] .La coloration au gramme a été réalisée à l'aide d'un gramme trousse de couleur (MerckChemicals, Allemagne). Pour observer la motilité, la technique droptique suspendue a été utilisée. Le glycérol formant la cétogenèse, la gélose Growth sur glutamate et l'assimilation de l'azote ammoniacal ont été étudiés sur la base des méthodes décrites par Asai et al. [1]. L'utilisation de divers substrats comme source de carbone a été testée de la manière décrite par Shirling et Gottlieb. La production d'acide à partir de D-glucose, de D-sorbitol et de D-mannose a été déterminée comme décrit par Takeuchi et Hatano. Un kit API 20E (bioMérieux, France) a été utilisé pour examiner la liquéfaction de la catalase, de l'oxydase, du citrate, du lactose, de l'arginine et des nitrates. Analyses d'acides gras cellulaires et de quininines. Les acides gras de cellules entières ont été extraits et analysés selon les instructions de Microbial. Système d'identification (MIDI Inc., USA). Après extraction, les ubiquinones ont été isolées selon le procédé décrit par Yamada et Kondo [23], et identifiées à l'aide des méthodes décrites par Tamaoka et al. Effets des conditions de culture sur la production d'acide acétique Les effets de la température et du pH sur la croissance et la production d'acide acétique par la souche KJY8 ont été examinés dans un bouillon GYC pendant 7 jours à 30 ° C. La teneur en éthanol, la température et le pH ont varié au cours de la culture de la souche KJY8 dans un milieu GYC liquide. La concentration en acide acétique a été déterminée par titration-acidité. Résultats et discussion Écran de dépistage de bactéries productrices d'acide acétique à partir de bactéries produisant du vinaigre isolées à partir de vinaigre traditionnel fabriqué dans la ville de Daegu et la province de Gyeongbuk. Plusieurs centaines de colonies ont été cultivées sur une plaque sélective. Dix souches produisant un grand halo clair ont été sélectionnées comme bactéries produisant de l'acide acétique. Une souche prédominante (KJY8) a été sélectionnée sur la base de la taille du haloformé clair sur la plaque GYC (tableau 1). Comparée à la souche de contrôle A. pomorum KCTC 22319, la souche KJY8 présentait une production d'acide acétique supérieure, déterminée par la taille du halo clair produit autour des colonies. Identification de la soucheLa séquence complète du gène de l'ARNr 16S a été déterminée pour la souche isolée KJY8. La figure 1 montre l'arbre phylogénétique dérivé des séquences d'ARNr 16S de 19 souches de type Acetobacter et d'autres membres de la famille des Acetobacteraceae. L'analyse phylogénétique a révélé que la souche KJY8 est un membre du genre Acetobacter et qu'elle est étroitement apparentée à A. pomorum LHT2458T, qui présentait la plus grande similarité dans la séquence d'ARNr 16S (99,7%) avec KJY8. Cependant, l’analyse phylogénétique nous a également donné l’idée que A. pomorum LHT 2458T. pourrait être transféré à A. pasteurianus LMG 1262T, car il oxyde l'acétate et le lactate, a pour principal ubiquinone Q9 et présente un niveau élevé de similarité de séquence d'ARNr 16S avec la souche type de A.pasteurianus LMG 1262T [13]. Selon nos résultats. , la souche KJY8 est distincte de G. oxydansDSM 3503T, d'A. syzygii 9H-2T, d'Aceti NCIMB 8621T et d'A.indonesiensis NRIC 0313T. motile. Les cellules étaient composées de bâtonnets dans un milieu GYC à 30 ° C et se trouvaient seules, en paires ou, occasionnellement, en chaînes courtes. Après incubation sur du milieu GYC pendant 7 jours, les colonies étaient blanc pâle, lisses à rugueuses et convexes à plates (tableau 2). Parmi les divers composés utilisables comme sources de carbone et d'énergie, la souche KJY8 utilisait l'éthanol, le D-glucose, le D-mannitol et le D-fructose. De l'acide acétique a été produit à partir de tous les substrats testés (D-glucose, D-mannose et D-sorbitol). Une réaction négative a été enregistrée pour le glycérol, le sorbitol, le méthanol, le n-propanol, le méso-xylitol, la L-arginine, la L-asparagine, Acide L-glutamique et L-lysine. Dans le bouillon GYC, la souche a augmenté à des températures allant de 20 ° C à 35 ° C, à un pH optimal de 3,0. La souche KJY8 a oxydé l'acétate et le lactate en CO2 et H2O. Cependant, le test de l'oxydase était positif et le nitrate n'était pas réduit en nitrite. La souche KJY8 avait une teneur en G + C de 60,8 mol%, telle que déterminée par HPLC. La teneur en ADN génomique G + C des autres souches du genre Acetobacter est de 53-63 mol%. Toutes ces caractéristiques suggèrent que la souche KJY8 est très similaire à A. pomorum LHT 2458T
