Colletotrichum circinans

Lors de l'étude de l'étiologie des maladies de l'oignon dans le sud de l'Argentine, un champignon coelomycète a été associé à diverses expressions de la maladie. Ils comprenaient les symptômes de maculage typiques des bulbes d'oignon blanc sur les marchés locaux ainsi que des infections de champ sur des cultivars de couleur jaune et rouge, avec de graves infections sur des greffes dans le lit de semence. Le champignon a été isolé et identifié comme étant Colletotrichum circinans sur la base de ses caractéristiques morphologiques, morphométriques, biologiques et pathologiques. Deux isolats, obtenus à partir de bulbes blancs et de greffes, ont été inoculés sur des bulbes de cultivars de couleur blanche et jaune et ont produit les symptômes de maculage typiques sur les écailles externes. Les postulats de Koch ont été remplis en ré isolant le champignon inoculé. Il s'agit du premier signalement de C. circinans dans le sud de l'Argentine et de la première observation de la maladie sur le terrain dans ce pays.

Colletotrichum circinans; Oignon; Tache; Argentine du sud.

Résultats de recherche des entreprises partenaires dans la région de l'Argentine sur le continent argentin, un hongo celomiceto a été associé à des associations de personnes patrimoniales. Informations sur les acheteurs, les fabricants de cartes de vœux et les revendeurs de cartes de crédit, les vendeurs de cartes de visite, les vendeurs de chaussures de cuisine, les vendeurs de voitures de cuisine et les vendeurs de chaussures de chambre, y compris les femmes de chambre de commerce Voir aussi Colletotrichum circinans , dont la base de données contient les caractères morfológicas, morfométricas, biológicas y patológicas. Informations sur les produits obtenus avec les bulbes blancs avec les plantes cultivées, avec les précautions à prendre pour la production et les cultures de plantes blanches et colorées, et pour les reproductions de reproductions de crayons de couleurs et de plantes. Se loger à l'heure actuelle dans les dernières semaines à partir des postulats de Koch. Liste des lecteurs enregistrés dans les circulaires en Condo de Campo, en Argentine, et dans la base de données du pays.

INTRODUCTION

L'oignon est la principale culture horticole dans la vallée inférieure du Colorado (LRCV) et dans d'autres régions du sud de l'Argentine. Réciproquement, le LRCV est de loin la plus importante région productrice d’oignons en Argentine. Plus d'une douzaine de maladies, causées par des champignons, des bactéries et des virus, constituent la principale contrainte pour la production et la commercialisation des oignons (Kiehr et al. 1996; Kiehr et Delhey, 2007). Nous rapportons ici des taches (appelées "tizne" en espagnol) et des maladies de l’oignon associées, causées par le coelomycète Colletotrichum circinans (Berk.) Voglino. Ce champignon a été décrit pour la première fois au Royaume-Uni et est maintenant répandu, en particulier dans l'hémisphère nord. Le smudge est normalement considéré comme l'une des maladies mineures de la culture de l'oignon (Entwistle, 1990; Sumner, 1995). 
En Argentine, JB Marchionatto, de Bell Ville, dans la province de Córdoba, a détecté pour la première fois des oignons infectés par des taches en 1928 (fide Gatica et al. 2010). Plus tard, il a été enregistré sur un oignon blanc à Colonia Tirolesa, Córdoba (Docampo & Nome, 1970); sur les ampoules du cv blanc. Chata Blanca, au marché central de Buenos Aires (Vigliola & Calot, 1982) et aux marchés locaux de la province de Jujuy (Alcoba et al. 1986). Nous n'avons connaissance d'aucun enregistrement sur le terrain de C. circinans en Argentine et, jusqu'à présent, aucune maladie par maculage n'a été détectée dans le virus LRCV ou dans d'autres zones de production du sud. À notre connaissance, il n’existe aucune description détaillée du champignon en Argentine et aucune expérience d’inoculation n’a été rapportée.

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Colletotrichum circinans a été isolé des écailles extérieures des bulbes d'oignon et des lésions des gaines des feuilles des greffes d'oignons. Le tissu infecté a été désinfecté superficiellement avec NaOCl (0,8% de Cl actif) pendant 0,5 min, séché avec du papier stérile et de petits morceaux ont été découpés et déposés sur de la gélose à la pomme de terre et au dextrose (PDA) et de la gélose à l'eau dans des boîtes de Pétri.
Des expériences d'inoculation ont été effectuées avec deux isolats, l'un obtenu à partir de bulbes d'oignon à chair blanche et l'autre de greffes infectées dans le lit de germination. Bulbes de taille moyenne d'un cultivar d'oignon blanc non identifié et du cv à écailles jaunes. Les Valcatorce ont été nettoyés de la terre, des racines et des écailles externes en vrac adhérentes, immergés dans de l'éthanol à 96% et renommés sous peu à leur partie basale. Ensuite, ils ont été plantés dans des pots avec un sol à deux autoclaves modifié avec des colonies mycéliennes en croissance active âgées d'environ 15 jours (une plaque PDA de 9 cm / 600 ml de sol). Les pots ont été placés à la température ambiante dans le laboratoire. Après trois à quatre semaines, les plantes ont été déracinées et les symptômes observés sur les écailles externes et les racines ont été observés. Les plantes de contrôle non inoculées ont été cultivées dans un sol non infesté.

RÉSULTATS

Distribution géographique et symptômes. Des maladies causées par C. circinans ont été découvertes quatre fois sur le terrain et deux fois sur les marchés locaux de la ville de Bahía Blanca. Dans ce dernier cas, il s’agissait d’oignons à écailles blanches de cultivar et d’origine inconnus, présentant les symptômes typiques du maculage: taches noires fréquemment organisées en anneaux concentriques, formant des plaques atteignant jusqu’à 1 cm de diamètre ( Fig. 1, A ). Ces taches sont constituées de masses stromatiques ( Fig. 2, A ) et de petits acervules à soies étroites et sombres ( Fig. 2, B ) visibles à l'aide d'une loupe.

Fig. 1. Symptômes de la maladie sur: (A) un cultivar à échelle blanche non identifié; (B) cv. Valcatorce; (C) cv. Torrentina; (D) greffe d'oignon. 
Fig. 1. Síntomas de enfermedades en: (A) un cultivar de couleurs blanches non identifié; (B) cv. Valcatorce; (C) cv. Torrentina; (D) transplantes de cebolla.

Fig. 2. Colletotrichum circinas : (A) masses stromatiques; (B) acervuli avec soies; (C) conidies; (D) appressoria. 
Fig. 2. Colletotrichum circinas : (A) masas estromáticas; (B) acérvulos con setas; (C) conidios; (D) apresorios.

Sur le terrain, nous avons observé le flétrissement et la mort de greffes de cv. Valcatorce dans un lit de semences très dense dans la localité de Pedro Luro, LRCV. Des lésions en expansion avec une bordure brun foncé et un centre blanc sont apparues sur les gaines des feuilles; plus tard, cette partie centrale est devenue nécrotique et est tombée de ( Fig. 1, D ). Des acervules avec des soies sombres ont été observés sur de telles lésions. 
Dans un champ d'oignons verts de la Ceinture verte de Bahía Blanca (GBBB), nous avons observé un début de flétrissement chez les plantes d'un cultivar à écailles rouges non identifié. Des lésions foncées de couleur brun olivâtre avec acervules typiques ont été observées sur la partie basale des écailles du bulbe externe. Dans un autre champ de la même région cultivé avec cv. Valcatorce pour la production de bulbes, près de la récolte, nous avons observé des taches olivacées sombres dans la partie basale encore non colorée des écailles externes ( Fig. 1, B ), avec des stromas typiques et de nombreux acervules. 
Enfin, dans un lot expérimental de la GBBB planté de CVS. Torrentina et Valcatorce qui sont restées partiellement non récoltées, à la fin de l’automne, sur la plupart des bulbes restants de cv. De larges taches de bavure apparaissent à Torrentina, fréquemment en anneaux concentriques (Fig. 1, C ). Il y avait beaucoup moins de taches sur les bulbes de Valcatorce.

Morphologie fongique. Les isolats obtenus ont été cultivés sur PDA. Acervuli avec des soies aciculaires sombres, presque noires, à base bulbeuse et 1 à 3 septa, mesurées jusqu'à 290 x 8 µm ( Fig. 2, B ). Les conidies étaient hyalines, unicellulaires, 16-25 x 3-5 µm, légèrement falceuses et guttulées ( Fig. 2, C ).Les apressoria, formées dans les bords des boîtes de Pétri, étaient sous-globulaires, ellipsoïdes, clavates ou irrégulières, à 1 ou 2 cellules, mesurant de 6,5 à 13,5 x 5,5 à 8 µm ( Fig. 2, D ). Dans des cultures âgées de plusieurs mois, des appressories secondaires, tertiaires et quaternaires peuvent être formées par des processus de germination successifs.

Test de pathogénicité. Les deux isolats ont produit des symptômes similaires, consistant en des taches typiques de maculage sur les bulbes d'oignons blancs, avec des masses stromatiques et la formation d'acervuli. Sur les bulbes de Valcatorce à écailles jaunes, seules quelques lésions se sont développées et uniquement sur des écailles non colorées. C. circinans a été récupéré à partir des bulbes inoculés des deux cultivars. Aucun symptôme n'a été observé sur les contrôles non inoculés.

DISCUSSION

Plusieurs Colletotrichum spp. Ont été signalés en tant qu'agents pathogènes de l'oignon dans le monde entier (Farr et Rossman, 2012). C. gloeosporioides et C. coccodes ont des conidies droites et infectent principalement les feuilles et les cous des plants d'oignon (Hill, 1995; Rodríguez-Salamanca et al. 2012), tandis que C. circinans provoque principalement, mais non exclusivement, les symptômes typiques du maculage. sur les bulbes et les conidies sont falciformes (Sumner, 1995). Cette dernière espèce est étroitement apparentée à C. spinaciae sur Amaranthaceae (Damm et al. 2009). Sur la base de ses traits morphologiques, morphométriques, biologiques et pathologiques, le champignon étudié par nous est identifié comme étant C. circinans. 
Ce sont les premières mentions de C. circinans dans le sud de l'Argentine. C’est aussi la première fois que des infections corporelles sont décrites en Argentine. Au cours de nos études, des infections très diverses ont été observées, indiquant que C. circinans est un agent pathogène assez polyvalent. Cependant, il est normalement associé aux symptômes typiques de maculage sur les bulbes d’oignons blancs pendant la période post-récolte. Ce dernier aspect n’a été signalé que dans les supermarchés de la ville de Bahía Blanca, mais jamais dans la production locale du LRCV où, à l’heure actuelle, le maculage n’est pas économiquement important. Les oignons blancs sont principalement cultivés pour le marché européen, et les producteurs appliquent un système de rotation adéquat qui peut expliquer l'absence de maculage. Cette situation pourrait changer si la superficie d'oignons blancs dans la région augmentait. 
Il est assez rare que C. circinans adore les bulbes d'oignons colorés. Si tel était le cas, les symptômes ont tendance à apparaître dans le cou du bulbe (Walker, 1921). Nous avons trouvé des symptômes dans les CV à échelle jaune. Valcatorce et Torrentina et dans un cultivar de couleur rouge non identifié. Dans cv. Valcatorce c’était la partie basale de la balance qui était normalement touchée; et cela se produisit principalement dans des écailles non encore complètement colorées. On sait que les substances phénoliques présentes dans les écailles extérieures des oignons colorés inhibent la croissance de C. circinans (Walker, 1923; Walker & Stahmann, 1955). Nous avons également constaté une attaque grave de C. circinans sur des greffes d'oignons, très rarement observée, bien que ce champignon puisse parfois tuer des pépinières entières (Heinze, 1974). 
Les deux isolats de C. circinans ont provoqué des symptômes identiques lorsqu’ils ont été inoculés à des plantes de couleur blanche et jaune. Les postulats de Koch ont été remplis en récupérant le champignon des bulbes inoculés. 
Nous concluons que C. circinans est actuellement un pathogène mineur de l’oignon dans le sud de l’Argentine. Néanmoins, les producteurs devraient prendre des mesures de précaution afin de ne pas introduire le champignon dans de nouvelles zones de production ou de nouveaux champs de production. Là où il est déjà présent, il convient de prévenir la constitution de rotations et d'éviter que des bulbes non récoltés et d'autres résidus ne restent trop longtemps sur le terrain.

L'anthracnose est apparue fréquemment sur les gaines de feuilles d'oignons gallois cultivés sur l'île de Gangwha, en Corée, en novembre 2007. L'incidence de la maladie atteignait 30% dans cinq champs étudiés. Un total de 20 isolats à une seule spore d'espèces de Colletotrichum a été obtenu à partir des plantes affectées, et tous les isolats ont été identifiés comme étant Colletotrichum circinans sur la base de leurs caractéristiques morphologiques et culturelles. Trois isolats du champignon ont provoqué des symptômes de l'anthracnose sur les gaines des oignons gallois par inoculation artificielle, qui étaient similaires à ceux observés lors de l'enquête sur le terrain. Dans cette étude, les caractéristiques mycologiques et pathologiques de C. circinans identifiées comme provoquant l'anthracnose des oignons gallois sont clarifiées.

L'oignon gallois ( Allium fastuosum L.) est largement cultivé dans les régions tempérées et subtropicales du monde. La plante est couramment cultivée en Corée et est un légume important pour la cuisine. Des symptômes de l'anthracnose ont été fréquemment observés sur les gaines des oignons gallois cultivés dans l'île de Gangwha, en Corée, lors d'une enquête sur la maladie réalisée en novembre 2007. Les symptômes se présentaient sous la forme de taches noires irrégulières sur les gaines et les gaines infectées étaient blanchies ( Fig. 1A et 1B ). Des masses de conidies grisâtres ont été produites parfois sur les taches noires. Huit champs d'oignon gallois ont été étudiés pour la survenue de la maladie. L'incidence de la maladie a atteint jusqu'à 30% dans cinq domaines étudiés. La maladie ne s'est pas produite dans les autres champs étudiés.

Fig. 1

Symptômes de l'anthracnose observés sur le terrain sur des plants d'oignons gallois. A et B, des taches noires irrégulières sur les gaines foliées.

Un total de 20 isolats de spores uniques d'espèces de Colletotrichum a été obtenu à partir de gaines de feuilles symptomatiques de l'anthracnose de l'oignon gallois. Les caractéristiques morphologiques et culturelles des isolats ont été examinées à des fins d'identification. Tous les isolats ont été identifiés comme étant Colletotrichum circinans (Berk.) Voglino. Les caractéristiques morphologiques de C. circinans que nous avons examinées étaient similaires à celles décrites par Sutton ( 1992 ) ( tableau 1 ).

Tableau 1

Caractéristiques morphologiques de Colletotrichum circinans isolé à partir de gaines de feuilles d'oignon gallois

Les colonies de C. circinans cultivées sur de la gélose pomme de terre-dextrose (PDA) avaient un brun foncé avec des mycéliums aériens grisâtres. Des sclérotes et des soies globuleuses à pulvinaires ou irréguliers ont été produits abondamment à la surface des colonies ( Fig. 2A ). Les soies produites sur les lésions étaient brun foncé à noires, 1 ~ 5 septate et mesuraient 32,5 ~ 177,5 × 3,0 ~ 7,0 ( Fig. 2B ). Les conidies étaient falciformes, fusiformes, progressivement effilées à chaque extrémité et mesuraient de 16,5 à 27,5 × 3,0 à 4,5 µm ( Fig. 2C ). Les appressoires étaient bruns à brun foncé, globuleux à claveux, lobés à irréguliers et mesurés entre 6,5 et 15,0 × 5,0 à 7,5 µm ( figure 2D ). La plage de température et la température optimale pour la croissance mycélienne du champignon sur du PDA étaient de 10 à 35 ? et de 26 à 28, respectivement.

Fig. 2

Caractéristiques morphologiques et culturelles de Colletotrichum circinans isolé des gaines foliaires de l’oignon gallois. A, une colonie âgée de 20 jours cultivée sur PDA à 24; B, soies sur les lésions (barre d'échelle = 40 µm); C, conidies (barre d'échelle = 20 µm); D, appressoria (échelle = 20 µm).

Trois isolats de C. circinans ont été testés pour déterminer leur pouvoir pathogène sur les gaines et les feuilles d'un oignon gallois (cultivar Seokchangoedaepa) par inoculation artificielle avec des suspensions de conidies (1 ~ 2 × 10 ⁶ conidies / ml) préparées à partir de cultures de PDA âgées de 20 jours. . Les inoculations ont été effectuées en déposant 20 µl de suspensions de conidies sur chaque signe (25 cm de longueur) des gaines des feuilles et des feuilles d'oignon gallois âgé de 5 mois dans des boîtes en plastique humides (39 × 32 × 14 cm). La même quantité d'eau distillée stérile a été utilisée comme témoin. Les boîtes en plastique ont été placées dans un incubateur à 26 pendant cinq jours. Les cotes de maladie ont été établies en fonction du degré de symptômes de l'anthracnose induits sur les gaines et les feuilles cinq jours après l'inoculation. Le test d'inoculation a été réalisé en trois répétitions indépendantes.

Tous les isolats testés de C. circinans ont induit des symptômes d'anthracnose sur les gaines des feuilles à la suite d'une inoculation artificielle, mais pas sur les feuilles ( tableau 2 ). Les symptômes étaient similaires à ceux observés lors de l'enquête sur le terrain. L'espèce fongique a été isolée à nouveau des zones touchées.

Tableau 2

Pouvoir pathogène des isolats de Colletotrichum circinans sur des plants d’oignons du Pays de Galles par inoculation artificielle

La gravité de la maladie a été évaluée cinq jours après l’inoculation. +, lésions de l'anthracnose produites; -, pas de symptôme.

C. circinans était précédemment enregistré sous le nom de Colletotrichum dematium (Pers.) Grove f.circinans (Berk.) Arx, qui est spécifique à Alliums spp. ( Arx, 1957 ; Arx, 1970 ; Arx, 1981 ). Cependant, Sutton ( 1992 ) a décrit C. circinans comme une espèce distincte de C. dematium . Il a été rapporté que le champignon cause des taches ou des taches foliaires sur Allium spp. ( Farr et al., 1989 ). Le champignon est également enregistré en Corée comme pathogène de l'anthracnose de l'oignon et de l'oignon gallois ( Cho et Shin, 2004 ). Cependant, il n'y a pas eu de rapport détaillé sur les caractéristiques mycologiques et pathologiques de C. circinans provoquant l’anthracnose des plantes. Dans cette étude, les caractéristiques mycologiques et pathologiques de C. circinans provoquant l'anthracnose de l'oignon gallois ont été clarifiées.

Premier signalement de Colletotrichum circinans causant une bavure sur un oignon en Iran

En octobre et novembre 2012, des bulbes d'oignons à peluche blanche présentant des symptômes nécrotiques ont été recueillis dans la zone de culture de la province du Khuzestân. Les symptômes étaient des taches sombres fréquemment organisées en anneaux concentriques, formant des plaques atteignant 1 cm de diamètre (Fig. 1). Ces taches sont constituées de masses stromatiques formées au-dessous de la cuticule de l'hôte, consistant en des fils de mycélium à parois épaisses entrelacés dans des stromas vert foncé à noirs, habituellement d'une fraction de millimètre de diamètre et de quelques centaines à plusieurs centaines de microns d'épaisseur. Le tissu atteint a été stérilisé en surface avec de l'hypochlorite de sodium (0,8% de chlore) pendant 30 secondes et séché avec du papier stérile avant l'excision et le transfert aseptique sur de la gélose au dextrose (PDA) et de la gélose à l'eau (WA) dans une boîte de Pétri et incubée dans sombre à température ambiante (30 ± 2 ° C). Les isolats cultivés sur PDA ont produit des acervules avec des soies aciculaires sombres, presque noires, de 1 à 3 septules ayant une base bulbeuse, mesurant jusqu'à 290 x 8 µm (Fig. 2 A, B). Les conidies étaient hyalines, unicellulaires, 16-25 x 3-5 µm, légèrement falceuses et guttulées (Fig. 1 C).

Une petite quantité de mycélium a été prélevée sur une culture âgée de sept jours et la région d'espacement interne (ITS) de l'ADN fongique extrait a été amplifiée avec les amorces universelles ITS1 et ITS4. La séquence résultante (509 pb) a été soumise à la NCBI GenBank (isolat IRAN2185C, numéro d’accession KJ458968,). Une fouille rapide de séquences ITS a révélé que ce champignon était Colletotrichum circinans avec une couverture de 100% des requêtes avec KC790955 et AJ301955 et une couverture de 99% avec GQ369595. Les tissus malades ont été coupés en longueurs de 1 à 2 cm, stérilisés en surface, et l'agent pathogène d'origine provenant d'oignons a été placé sur de la gélose à l'eau pour récupérer le champignon. La pathogénicité de trois isolats de C. circinans a été testée par inoculation artificielle avec des suspensions de conidies (1-2 x 10 conidies / ml) préparées à partir de cultures de PDA âgées de 20 jours. De l'eau distillée stérile a été utilisée comme témoin. Des boîtes en plastique contenant le matériau inoculé ont été placées dans un incubateur à 26 pendant cinq jours. Les cotes de maladie ont été établies en fonction du degré de symptôme d'anthracnose induit cinq jours après l'inoculation. Le test d'inoculation a été réalisé en trois répétitions indépendantes. C. circinans a été ré-isolé de ces lésions, conformément aux postulats de Koch. C. circinans était précédemment enregistré comme C. dematium (Pers.) Grove f. circinans Arx, qui est spécifique à Allium spp. (von Arx, 1970; von Arx, 1981). Cependant, Sutton (1992) a décrit C. circinans comme une espèce distincte de C. dematium. Le champignon cause des taches ou des taches foliaires sur Allium spp. (Farr et al ., 1989) et a été signalé en Corée, au Japon, en Chine, en Argentine, en Inde, au Royaume-Uni et dans la plupart des autres régions du monde (Cho & Shin, 2004; Kiehr et al. , 2012). C’est le premier signalement de C. circinans en Iran. Une culture de C. circinans a été déposée à l’Institut iranien de recherche sur la protection des plantes (IRAN2185C).